繁华大都会纽约，光影交错的人间乐土，相应有层出不穷的罪恶侵蚀着这片土地。小青年彼得·帕克（Christopher Daniel Barnes 配音）和唯一的亲人梅婶（Linda Gary 饰）相依为命，如许许多多美国青年一样穿行在繁忙的闹市街头。可就是这个平凡无奇的大男孩，却被一只受过辐射的蜘蛛咬中，继而改变了命运。在此之后，彼得发现他具有种种神奇的能力，而能力的增长又促使他成为独立于司法之外的正义战士，以蜘蛛侠的名头和各种各样的恶势力展开斗争。在此之后，毒蝎、章鱼博士、毒液、绿魔等可怕的对手交替登场，正邪双方在纽约各个角落展开接二连三的较量。在此期间，彼得还必须兼顾他英雄的另一面，小心平衡着和女友玛丽以及工作之间的关系。 蜘蛛侠的故事就在一片朝气蓬勃中渐次上演……
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仓田亚美（东山奈央 配音）是一名平凡的女大学生，运动神经十分不发达的她连在平地上走路都会摔跤，是一个实实在在的运动白痴。为了挽救声誉，亚美决定开始学习骑自行车，在此过程中，亚美竟然渐渐爱上了这项运动。 亚美的青梅竹马，右脑发达十分擅长运动的新垣葵（五十岚裕美 配音）、身材娇小但实际上个性非常成熟的西条雏子（大久保瑠美 配音）、沉默寡言，有着和清淡外表毫不相称的狂热与执着的一之濑弥生（黑泽由里香 配音）、个性独立来去自如的神秘女生高宫纱希（日笠阳子 配音），在半推半就之下，亚美加入了单车部。
